歡迎所內(nèi)外用戶預(yù)約使用！營(yíng)養(yǎng)與健康所所級(jí)公共技術(shù)中心質(zhì)譜系統(tǒng)
中國(guó)科學(xué)院上海營(yíng)養(yǎng)與健康研究所所級(jí)公共技術(shù)中心的質(zhì)譜系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)非靶向-靶向代謝組學(xué)、脂質(zhì)組學(xué)、代謝流檢測(cè)，包括常規(guī)中心碳能量代謝、氨基酸代謝、脂肪酸代謝、短鏈脂肪酸、葉酸等。
歡迎所內(nèi)外用戶預(yù)約使用！具體質(zhì)譜儀器、服務(wù)項(xiàng)目、聯(lián)系方式如下：
| 技術(shù)人員 | 負(fù)責(zé)儀器 | 聯(lián)系方式 |
| 李紫 | SCIEX TripleTOF 6600 LC-MS | zli@sinh.ac.cn |
| 褚倩倩 | Agilent 5975B-6890N GC-MS Bruker rapifleX MALDI-TOF質(zhì)譜成像 |
qqchu@sinh.ac.cn |
| 馬瑩 | Thermo Orbitrap Exploris? 480 LC-MS Agilent7700X電感耦合等離子體質(zhì)譜 |
yma@sinh.ac.cn |
| 王郡瑤 | Thermo Q Exactive? Plus LC-MS | jywang@sinh.ac.cn |
服務(wù)內(nèi)容
1 非靶向代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)
系統(tǒng)現(xiàn)有Thermo Scientific? Q Exactive? Plus Q-Orbitrap HRMS、Thermo Orbitrap Exploris? 480 質(zhì)譜儀, SCIEX TripleTOF 6600 LC-MS/MS三臺(tái)質(zhì)譜用于非靶向代謝組學(xué)檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確、快速地對(duì)各種類型生物樣本（血、尿、動(dòng)物組織、細(xì)胞和培養(yǎng)液等）中的小分子代謝物和脂質(zhì)進(jìn)行一級(jí)二級(jí)檢測(cè)，獲取整體全面的代謝組信息，從而應(yīng)用于篩查生物標(biāo)志物，研究疾病發(fā)病的代謝通路，發(fā)現(xiàn)未知代謝物等多種研究。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）QE Plus和480，分辨率高、靈敏度高、樣本需求量小，可快速正負(fù)切換掃描，提高檢測(cè)效率，獲質(zhì)譜信息；
（2）TripleTOF 6600可提供正負(fù)離子分開(kāi)掃描，提高檢測(cè)代謝物數(shù)，可提供常見(jiàn)的非靶向代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)檢測(cè)服務(wù)；
（3）全掃模式下，質(zhì)量準(zhǔn)確度優(yōu)于1ppm，確?？煽康幕衔镨b定結(jié)果；
（4）結(jié)合Compound Discoverer軟件，對(duì)在線mzCloud譜庫(kù)和內(nèi)部mzVault庫(kù)進(jìn)行搜索，快速鑒定未知代謝物，使用Metabolika、KEGG和BioCyc數(shù)據(jù)庫(kù)查看通路，并將檢測(cè)到的化合物映射到通路上。
結(jié)果展示
圖1. TripleTOF 6600利用基于高分辨質(zhì)譜的代謝組學(xué)技術(shù)與機(jī)器學(xué)習(xí)方法系統(tǒng)揭示了痛風(fēng)和高尿酸血癥中顯著改變的代謝通路，成功篩選到了13種潛在的代謝物，用以區(qū)分無(wú)癥狀高尿酸血癥和痛風(fēng)患者。
圖2. QE Plus質(zhì)譜非靶向代謝組學(xué)負(fù)離子模式下肝臟樣本代謝物檢測(cè)結(jié)果(可檢測(cè)到>3000個(gè)feature）
送樣建議
| 樣本類型 | 常規(guī)送樣量 | 最少送樣量 |
| 血清 | ≥50μL | ≥5μL |
| 動(dòng)物組織 | ≥20mg | ≥5mg |
| 細(xì)胞 | 107 | 1*106 |
| 其他特殊樣本 | 請(qǐng)聯(lián)系平臺(tái)老師咨詢 | |
2 靶向代謝組學(xué)
系統(tǒng)現(xiàn)有Agilent 5975B-6890N氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀及Thermo Q Exactive? Plus Q-Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀用于靶向代謝組學(xué)檢測(cè)。其中5975B-6890N用于短鏈和中長(zhǎng)鏈脂肪酸的檢測(cè)與定量分析；QE Plus用于常見(jiàn)代謝通路中小分子代謝物的檢測(cè)與定量分析。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）5975B-6890N具有30多種中長(zhǎng)鏈脂肪酸，7種短鏈脂肪酸內(nèi)標(biāo)定量方法；
（2）QE Plus具有600+標(biāo)準(zhǔn)品自建數(shù)據(jù)庫(kù)，標(biāo)準(zhǔn)品種類齊全，包含常見(jiàn)代謝通路中的代謝物（糖酵解、TCA、氨基酸代謝、氧化還原代謝、NAD代謝、甲硫氨酸循環(huán)等）；
（3）支持多類型樣本檢測(cè)，樣本需求量低；
（4）平臺(tái)通用QC質(zhì)控樣本，標(biāo)準(zhǔn)化工作流程，提供優(yōu)質(zhì)數(shù)據(jù)。
結(jié)果展示
????圖3. 30多種中長(zhǎng)鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品譜圖
????圖4. 七種短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品譜圖
送樣建議
| 樣本類型 | 常規(guī)送樣量 | 最少送樣量 |
| 血（血清、血漿） | ≥200μL | ≥50μL |
| 動(dòng)物組織 | ≥100mg | ≥20mg |
| 細(xì)胞 | 107 | 5*106 |
| 糞便 | ≥100mg | ≥50mg |
| 其他特殊樣本 | 請(qǐng)聯(lián)系平臺(tái)老師咨詢 | |
3 同位素示蹤代謝物檢測(cè)及代謝流分析
利用Thermo Scientific? Q Exactive? Plus組合型四極桿-Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀及穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)手段，探索小分子代謝物經(jīng)由的代謝反應(yīng)途徑及代謝物標(biāo)記速率，推算代謝物在各代謝通路中的流向和分布。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）能夠提供常見(jiàn)代謝物的示蹤劑（13C、15N、2H）；
（2）覆蓋常見(jiàn)代謝途徑（包括糖酵解、三羧酸循環(huán)、磷酸戊糖途徑、氨基酸代謝、核苷酸代謝、NADPH 等代謝途徑）；
（3）擁有完整、規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)的穩(wěn)定同位素示蹤代謝組學(xué)操作和數(shù)據(jù)處理流程；
（4）相關(guān)代謝流技術(shù)專家數(shù)據(jù)復(fù)核及咨詢。
結(jié)果展示
????圖5. 13C-谷氨酰胺標(biāo)記三羧酸代謝物和脂肪酸
????圖6. [U-13C]-營(yíng)養(yǎng)物作為示蹤劑研究各營(yíng)養(yǎng)物對(duì)于各個(gè)組織器官的三羧酸循環(huán)的代謝流計(jì)算結(jié)果。
送樣建議
| 樣本類型 | 常規(guī)送樣量 | 最少送樣量 |
| 血清 | ≥50μL | ≥5μL |
| 動(dòng)物組織 | ≥20mg | ≥5mg |
| 細(xì)胞 | 107 | 1*106 |
| 其他特殊樣本 | 請(qǐng)聯(lián)系平臺(tái)老師咨詢 | |
4 空間代謝組學(xué)
利用Bruker質(zhì)譜成像rapifleX MALDI-TOF/TOF對(duì)生物樣本組織切片中內(nèi)源性代謝物或外源性藥物等進(jìn)行靶向檢測(cè)和非靶向分析，并用成像分析軟件SCiLS Lab對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）給出代謝物分子空間分布信息，即代謝分子成像圖；
（2）可進(jìn)行空間聚類分析、ROC分析、代謝物統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析等；
（3）樣本類型較廣，包括臨床組織樣本、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、植物組織等；
（4）代謝物分子空間共定位。
結(jié)果展示
????圖7. 質(zhì)譜成像實(shí)驗(yàn)流程
????圖8：小鼠胸腺切片脂肪酸質(zhì)譜成像
Lin, L., Hu, M., Li, Q.?et al.?Oleic acid availability impacts thymocyte preprogramming and subsequent peripheral Treg?cell differentiation.?Nat Immunol?(2023).
送樣建議
組織樣本可以是臨床樣本，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織或植物組織等，通常使用新鮮的組織樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，推薦使用CMC或明膠對(duì)組織進(jìn)行包埋，切記不要使用OCT包埋。切片厚度通常8~12μm，進(jìn)行質(zhì)譜成像的組織切片需使用ITO導(dǎo)電載玻片。
5 蛋白組學(xué)
利用Orbitrap Exploris 480進(jìn)行高通量蛋白鑒定、定量和結(jié)構(gòu)表征。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）儀器具有最高48萬(wàn)分辨率，質(zhì)量精度高，可以提供高質(zhì)量圖譜；
（2）可提供蛋白質(zhì)全譜（shotgun）分析、蛋白質(zhì)膠點(diǎn)/膠條分析、互作蛋白質(zhì)鑒定等服務(wù)內(nèi)容；
（3）對(duì)IP、co-IP以及pull-down方法制備的SDS-PAGE膠條鑒定：膠條 → 膠內(nèi)酶解 → LC-MS/MS → 數(shù)據(jù)庫(kù)搜索 → 蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果；
（4）對(duì)某一生理狀態(tài)下組織、細(xì)胞或細(xì)胞器中所有表達(dá)蛋白質(zhì)鑒定：蛋白質(zhì)溶液→溶液內(nèi)酶解→ LC-MS/MS→數(shù)據(jù)庫(kù)搜索→蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果；
（5）對(duì)IP、co-IP以及pull-down等純化溶液樣本進(jìn)行蛋白鑒定：蛋白質(zhì)溶液→溶液內(nèi)酶解→ LC-MS/MS→數(shù)據(jù)庫(kù)搜索→蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果。
結(jié)果展示
????圖9. 500ng 293t運(yùn)行120min，鑒定蛋白數(shù)目6035個(gè)，肽段32425個(gè)
送樣建議
| 樣本類型 | 推薦送樣量 | 注意事項(xiàng) |
| SDS-PAGE 膠條帶 | 明顯可見(jiàn)的考染膠條帶或質(zhì)譜兼容銀染膠條帶 | 溴酚藍(lán)最少進(jìn)分離膠1cm；建議膠的濃度不大于10% |
| 蛋白凍干粉 | 總量>10μg(蛋白濃度不小于1mg/ml) | 溶液中不要含有SDS、CHAPS、Triton X-100、NP 40及吐溫20、40等系列去污劑；鹽濃度小于50mM.若溶液中加過(guò)SDS loading buffer，請(qǐng)重新制備或跑膠后送膠條樣品 |
| 蛋白溶液 | 總量>20-50μg(蛋白濃度不小于1mg/ml) | |
| 其他特殊樣本 | 請(qǐng)聯(lián)系平臺(tái)老師咨詢 | |
6 元素分析
利用Agilent 7700X電感耦合等離子體質(zhì)譜儀進(jìn)行快速、痕量多元素分析。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
（1）豐度靈敏度：低質(zhì)量端≤5×10-7；高質(zhì)量端≤1×10-7；
（2）支持多樣本類型檢測(cè)。常規(guī)生物樣本、乳粉、發(fā)酵液及其他需要元素分析的領(lǐng)域；
（3）多元素分析?？蛇M(jìn)行Ag, Al, As, Ba, Be, Ca, Cd, Co, Cr, Cs, Cu, Fe,Ga, Li, Mn, Mg, Ni, Pb, Rb, Se, Sr, Tl, U, V, Zn, B, Mo, Nb, Re, Ta, Ti, W, Zr 等分析。
結(jié)果展示
????圖10. Pb線性曲線及樣本檢測(cè)情況
送樣建議
| 樣本類型 | 一般送樣量 |
| 動(dòng)物和臨床各類組織樣本 | 50mg |
| 血樣（血清、血漿和全血） | 50μL |
| 尿樣 | 50μL |
| 糞便和腸道內(nèi)容物 | 25mg |
| 體液樣本（腦脊液和唾液） | 25μL |
| 細(xì)胞和微生物菌體 | 1*106cells |
| 培養(yǎng)基和發(fā)酵液 | 50μL |
| 乳粉 | 0.3g |
| 其他特殊樣本 | 請(qǐng)聯(lián)系平臺(tái)老師咨詢 |
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